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  • HE制片的质量控制

    2016-9-6 8:11:25 | 信息来源:病理室 陈程 | 查看:

     

    常规HE制片技术是病理制片的基础技术,也是病理医师作出病理诊断的重要依据。从事病理制片的病理技师,不仅要懂得病理制片技术的相关原理,还应熟练掌握HE制片技术的操作,这其中包括切片质量与染色效果。因此必须努力提高HE制片的质量,以保证病理医师作出正确合理的病理诊断。
    一、优质HE切片的质控要求
    病理技师将来自临床患者、尸体解剖的组织标本通过取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、摊片、贴片、烤片、染色和封片等一系列操作过程,制成一张玻片标本;在显微镜下观察时,达到核质清楚、红蓝分明、对比恰当、结构清晰,是我们病理技师应当追求的目标,这要求我们做到如下几点:
    1.切片:完整、厚薄均匀、组织无刀痕   
    切片完整是指把包埋的组织最大面积完整切出,这要求包埋时要尽量将组织最大面积埋平整,碎小组织也应均匀平埋。切片要求组织上无刀痕,有刀痕的切片影响美观,若刀痕在病灶处更会不利于诊断医师的诊断。
    2.贴片:位置恰当、无皱褶   
    贴片时应“定点”贴片,即把每张蜡片贴在载玻片标签处以外的玻片中间,这样既整齐美观,在镜下观察时又可在显微镜载物台较小范围内移动,方便操作,同时染色时也不会出现因贴片位置过高而试剂浸泡不到使染色不匀的情况。
    3.染色:鲜艳、对比清晰   
    组织和细胞经苏木精-伊红(HE)染色后,细胞核被染成蓝色,细胞浆、纤维、肌肉和红细胞等呈深浅不一的红色。染色要鲜艳,透明度好,红蓝分明,对比清晰,无偏蓝或偏红现象,才利于镜下观察,这要求病理技师随时注意染色剂的染色情况,调整染色时间,更换染色试剂。
    4.封片:无气泡、封胶不外溢   
    封片时所滴的树胶要适量,浓度要适中,以封胶后树胶充满又不外溢为宜,树胶浓度较高时可适量加入二甲苯加以稀释。
        此外,还应玻片整洁、标签端正、号码清楚。
       二、常见HE切片染色缺陷的成因和对策
    1.切片污染   
    包括染液的污染和组织的污染。染液的污染,是由于苏木精或伊红染料的絮状沉淀物所致,污染物遮盖该部位的细胞或组织而难以观察其形态改变,这种污染可通过定期过滤各种染液和试剂避免。组织污染是指由于切片和贴片过程中,被其他病例的组织和细胞污染,如果是不同类型的组织,容易在显微镜下发现,如果是被相同类型而不同病变的组织污染,则不容易在镜下发现,可能导致误诊。因此,在摊片时要非常小心,恒温贴片机里的水要注意更换或贴片后用纸在水面将残余蜡块拖走,以保证不污染。还有,取材时也可造成组织污染,在甲例取材后,如不及时把砧板和刀剪冲洗干净,若留下残余组织,在乙例取材时把甲例的残余组织误作乙例取材,同时放进脱水盒内,这样切片时,包括甲乙两例组织,造成组织污染。
    2.染色不均匀   
    即部分组织和细胞染色尚可,部分模糊不清,这种切片无法诊断。其原因是由于染色时二甲苯脱蜡不彻底,切片部分着色不好。常见于冬季室温低时,二甲苯的脱蜡力度降低,或使用已多次脱蜡的二甲苯所致。克服办法是在冬季室温低(14℃以下)时,应把二甲苯盛缸在水浴中适当加温至30℃脱蜡,或更换新的二甲苯。在脱蜡时把玻片架反复提起放下,可加速脱蜡。
    3.组织“发白”   
    镜下见细胞模糊不清,核不着色,呈灰白色。常见于淋巴结和鼻咽等组织。这是由于组织固定不当所致,当组织固定不及时、固定液不足或浓度过淡,或组织的致密度高、天气寒冷有关。淋巴结有一个致密的包膜,影响甲醛液的浸透;因此,固定前先把淋巴结对半切开,再行固定,可获得满意效果。
    4.切片内有大小不一的气泡   
    切片内气泡的出现,既影响美观,也妨碍阅片。气泡的产生,多因封片的树胶过浓或封片前吸管搅动树胶产生气泡所致。纠正方法是封片用的树胶浓度要适中,以提起吸管时胶如珠滴状慢慢滴下为宜,树胶过浓时,可适当加入二甲苯加以稀释;封片时不要随意搅动树胶,在树胶瓶外将吸管内空气排出,再伸入瓶内吸取树胶。气泡的出现也与封片时的技巧有关,滴树胶后,若盖玻片平放,则易产生气泡;若把盖玻片倾斜成一定的角度放下,即盖玻片一侧先接触树胶后再慢慢把盖玻片放下,则可避免气泡的出现。
    5.切片时不成片,整片易破碎   
    多因组织含血过多,含血过多的组织很脆,包埋后切片时易破碎不成片,常见于子宫刮出的血块和输卵管妊娠组织等。遇此情况,可向蜡块呵一口气后切片即会有所改善。
    6.切片时裂开不成片   
    切片时裂开,一方面是由于组织内有钙化灶或组织内有其他坚硬物体如小钢钉,在切片时就会出现大的刀痕,甚至使蜡片裂开分离;另一方面是由于在包埋时组织与石蜡融合不好,其间部分石蜡松浮,在切片时就使蜡片分离开裂。如有坚硬物体如小钢钉应将其取出,重埋再切;造成融合不好的原因是包埋石蜡的温度较低,包埋时动作不够快,应注意包埋石蜡的温度要比组织浸蜡的温度高数摄氏度(4-6℃),同时在包埋时操作要快,不要把组织翻来翻去。
    7.组织上有筛状小空洞   
    组织内出现筛状小空洞,常见于较软的组织如脑、子宫内膜和鼻咽粘膜等。原因是切片时过度冷冻蜡块使其过硬,则开始切出的前几张蜡片常出现筛状空洞。克服方法是在修平蜡块后,应多切数片使组织蜡块稍回暖后才开始选取蜡片。
    8.切片太厚或厚薄不均   
    切片太厚主要是刀片太钝或切片机内机械的磨损,造成轴承的松动,因此,需及时更换新的刀片,拧紧切片机的蜡块夹头和刀座上的螺旋,并注意切片机的修理和保养。其次是切片时余隙角太小,当刀锋第一次切片经过组织时为虚切,或切出很薄而不完整的切片;第二次切片经过组织面时因微米数增多而加厚,且因蜡块表面受压力而膨胀,因而切出较厚切片。出现此情况,就要调试刀座内的刻度盘,当余隙角为2°~4°时,就不会出现过厚或过薄的情况。
        当然,在实际工作过程中遇到的问题不止这些,我们应该注意发现问题、找到原因、解决问题,依照经验、结合实际,尽量减少乃至避免这些问题的存在,保证HE制片的质量,提供更优质的HE制片。
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